多房棘球绦虫OCT4基因的克隆及功能鉴定

【摘要】泡球蚴病是由多房棘球绦虫幼虫(泡球蚴)寄生于人畜等中间宿主肝脏等部位引起的寄生虫病,是世界性最危险的人畜共患寄生虫病之一。泡球蚴生发层细胞类似于哺乳动物胚胎干细胞,具有很强的自我更新能力和分化能力,它在泡球蚴的生长发育以及生活史循环中起着关键作用。生发层细胞多潜能性的维持是一个复杂的调控系统,其中OCT4基因是维持干细胞多潜能性的内源性因子。因此我们希望通过对泡球蚴内源性基因OCT4的研究,探讨泡球蚴生长发育的内在机制。本项目研究利用RACE技术获得了泡球蚴中编码OCT4同源基因的全长序列,利用生物信息学技术对基因结构进行分析,结果显示该基因编码的蛋白包含POU功能域,并且该功能域具有高度保守性。在此基础上,我们对泡球蚴OCT4可能同源性基因编码的蛋白(暂命名为EmOCT4)进行一系列功能分析。实验中,我们通过原核表达技术获得重组抗体,通过免疫组化技术对EmOCT4进行表达定位,结果表明EmOCT4蛋白在细胞核中表达。我们通过逆转录病毒载体介导的方法,将泡球蚴EmOCT4基因与鼠SOX2、KLF4、cMYC基因一同导入鼠成纤维细胞中,将其重编程,并且成功诱导出多能干细胞(iPSC)。这一结果表明EmOCT4在诱导鼠成纤维细胞中发挥了重要作用,是鼠OCT4蛋白的功能同源物,实验结果为进一步探讨EmOCT4在泡球蚴生发层细胞多潜能性维持中的作用提供了帮助。
【作者】商桂华；
【导师】王彦海；
【作者基本信息】厦门大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】泡球蚴；EmOCT4；多潜能性；生发层细胞；免疫定位；

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